метод визначення Гістологічне дослідження біоптату згідно гістологічної класифікації Всесвітньої організації охорони здоров'я (ВООЗ) з фарбуванням гематоксиліном-еозином. ІГХ-дослідження із застосуванням спектра тканеспеціфічних і прогностичних антитіл (до п'яти антитіл) (пероксидазний і авидин-біотіновий методи).

досліджуваний матеріал Дивіться в описі

Доступний виїзд на будинок

Комплексне дослідження біоптатів метастатических утворень різних локалізацій, що включає морфологічний опис і оцінку експресії спектра тканинних маркерів, для визначення гістогенезу первинного пухлинного вогнища.

За статистикою, в 3-15% випадків злоякісні пухлини маніфестують метастазами. Метастази без виявленого первинного вогнища характеризуються випадковою, нетиповою локалізацією і швидким прогресуванням процесу. Середня тривалість життя пацієнтів з трьома і більше метастатичними вогнищами поразки становить три місяці. При цьому локалізація первинного вогнища у 60-70% пацієнтів виявляється тільки на аутопсії. Своєчасна ІГХ-діагностика визначає тактику лікування до виявлення первинного вогнища.

Патоморфологическая діагностика метастазів невиявлених пухлин передбачає визначення їх морфологічного типу, уточнення ймовірного джерела метастазування, оцінку злоякісного потенціалу. Перше завдання вирішується при рутинному гістологічному дослідженні матеріалу біопсії (фарбування гематоксиліном-еозином), друга - застосуванням спеціальних методів дослідження: гистохимического, імуногістохімічного (ІГХ) або молекулярно-генетичного методу FISH (Fluorescence In Situ Hybridization).

При рутинної морфологічної діагностики метастатичні пухлини, згідно з рекомендаціями Європейського товариства медичної онкології ESMO (European Society for Medical Oncology) (2004), поділяються на п'ять великих категорій: аденокарцинома, плоскоклітинний рак, нейроендокринний рак, недиференційований рак, недиференційована пухлина. Ці морфологічні категорії, поряд з даними про поширеність процесу, в багатьох випадках дозволяють визначити адекватний план обстеження (і лікування). Так, наприклад, при виявленні метастазу плоскоклітинного раку в шийних лімфатичних вузлах необхідно ендоскопічне обстеження органів верхніх дихальних і травних шляхів. ІГХ-дослідження, в залежності від морфологічного типу новоутворення, дозволяє уточнити гістогенез пухлини і / або визначити ймовірну локалізацію первинного вогнища.

Для ІГХ-дослідження первинних пухлин і їх метастазів використовується широкий спектр тканеспеціфічних маркерів: -цітоспеціфічние (кластери диференціювання лейкоцитів (CD - Clusters of Differentiation), гладком'язових актин, міоглобін, тиреоглобулін); -маркери проліферації (Ki67, PCNA - Proliferating Cell Nuclear Antigen); -опухолевие маркери - онкофетальні антигени (фетопротеин, карциноембріональний антиген); -гормони (естроген, прогестерон); -ферменти, білкові продукти клітинних онкогенів і ін.

Єдиних алгоритмів при ІГХ-дослідженні метастазів пухлин без уточненого первинного вогнища не розроблено. Коректне визначення напрямку диференціювання пухлинних клітин і ряду біологічних параметрів пухлини саме по собі є показанням для призначення певних схем терапії. Наприклад, виявлення метастазів аденокарциноми в лімфовузлах пахвовій області може бути показанням до проведення терапії, аналогічної терапії раку молочної залози відповідної стадії. Виявлення експресії рецепторів естрогенів і прогестерону в такий аденокарциноме може стати показанням до призначення антигормональних терапії незалежно від наявності визначається пухлинного вузла в молочній залозі. Приклад алгоритму, рекомендованого для використання в диференціальної діагностики.

Матеріал для дослідження: биоптат пухлини, фіксований в парафіновому блоці.

література

1. Blaszyk H., Hartmann A., Bjornsson J. Cancer of unknown primary: clinicopathologic correlations. APMIS. 2003; 111 (12): 1089-1094.
2. Dabbs D.J. Diagnostic Immunohistochemistry: Theranostic and Genomic Applications. Elsevier, 4-th Edition. 2013: 960.
3. Di Patre P.L., Carter D. Sternberg "s Diagnostic Surgical Pathology Review. Wolters Kluver, 2-nd Edition. 2015: 488.
4. Dietal M., Wittekind С., Bussolati G., von Winterfeld М. Pre-Analytics of Pathological Specimens in Oncology. Sрringer. 2015: 133.
5. Dodd L.G, Bui M.М. Atlas of Soft Tissue and Bone Pathology. DemosMEDICAL. 2014: 720.
6. Edge S.B, Byrd D.R., Compton C.C., Fritz A.G., Greene F.L., Trotti A. AJCC Cancer Staging Manual. Sрringer, 7-th Edition. 2011: 646.
7. Elder D.E. Lever "s Histopathology of the Skin. Wolters Kluver, 11-th Edition. 2014: 1 544.
8. Epstein J., Netto G. Biopsy Interpretation of the Prostate. Lippincott Williams and Wilkins, 5-th Edition. 2014: 450.
9. Erickson L. Atlas of Endocrine Pathology. Sрringer, 1-st Edition. 2014: 178.
10. ESMO Minimum Clinical Recommendations for diagnosis, treatment and follow-up of cancers of unknown primary site. Annals of Oncology. 2005; 16 (S.1): 175-176.
11. Fletcher C.D.M., Bridge J.A., Hogendoorn P., Mertens F. WHO Classification of Tumours of Soft Tissue and Bone. WHO Press, 4-th Edition. 2013; 5: 427.
12. Kurman R.J., Carcangiu M.L., Herrington C.S., Young R.H. WHO Classification of Tumours of the Female Reproductive Organs. WHO Press, 4-th Edition. 2014; 4: 316.
13. Louis D.N., Ohgaki H., Wiestler O.D., Cavenee W.K. WHO Classification of Tumours of the Central Nervous System. WHO Press, 4-th Edition. 2007; 1: 312.
14. Malpica A., Euscher Е.D. Biopsy Interpretation of the Uterine Cervix and Corpus. Wolters Kluver, 2-nd Edition. 2015: 368.
15. Nishizuka S., Chen S.T., Gwadry F. et al. Diagnostic markers that distinguish colon and ovarian adenocarcinomas: identification by genomic, proteomic, and tissue array profiling. Cancer Research. 2003; 63: 5243-5250.
16. Nordi Q.C. http://www.nordiqc.org.

В наші дні розроблено безліч способів діагностики раку. Одним з найбільш достовірних методів виявлення онкологічних патологій є ІГХ-дослідження. Що це таке? Імуногістохімія (скорочено ІГХ) дозволяє з високою точністю виявити злоякісні клітини в матеріалі, отриманому за допомогою біопсії. Як проводиться такий тест? І як розшифрувати його результати? Ці питання ми розглянемо в статті.

опис процедури

Вченими встановлено, що клітини злоякісних пухлин виробляють специфічні білки - антигени. Імунна система сприймає ці речовини, як чужорідні агенти і починає виробляти антитіла проти них. Таким чином організм людини намагається боротися з пухлиною.

На реакції антигенів і антитіл і засноване ІГХ-дослідження. Що це таке? При проведенні імуногістохімії береться на аналіз шматочок тканини. Його обробляють антитілами до різних видів злоякісних клітин. Потім матеріал вивчають під мікроскопом і спостерігають за реакцією.

Якщо в шматочку тканини містяться ракові клітини, то їх антигени вступають у взаємодію з антитілами. При цьому в біоматеріалу відзначається світіння (флуоресценція). Це є ознакою наявності злоякісних клітин. Такий метод дозволяє виявити онкологічні захворювання з точністю 100%.

Методика аналізу

Пацієнту роблять біопсію перед ІГХ-дослідженням. Що це таке? Під місцевою анестезією з пухлини відщипують шматочок тканини (біоптат). Цей матеріал і досліджують під мікроскопом. У деяких випадках на аналіз беруть тканини, видалені в ході хірургічної або ендоскопічної операції.

Потім биоптат знежирюють і обробляють парафіном. Це необхідно для збереження матеріалу. В результаті отримують парафінові блоки, які потім нарізають надзвичайно тонкими шарами.

Отримані зрізи обробляють препаратами з антитілами до різних видів злоякісних клітин. Це можуть бути такі набори для аналізу:

1. Мала панель. У цей набір входить до 5 антитіл.
2. Велика панель. Може містити від 6 до декількох десятків видів антитіл.

Вибір необхідних антитіл для дослідження залежить від передбачуваного діагнозу. У напрямку на аналіз лікуючий лікар вказує - які саме види антигенів необхідно виявити у пацієнта. Залежно від цього і підбирають реагенти для тесту.

Отримати результати аналізу на руки можна через 1 - 2 тижні після проведення дослідження.

Що показує аналіз

Нерідко пацієнтам призначаю одночасно гистограмму і ІГХ-дослідження. Що це таке, і чим відрізняються ці два види аналізів? При гистограмме біоматеріал досліджують під мікроскопом і визначають наявність ракових клітин. При иммуногистохимическом дослідженні злоякісні новоутворення виявляють за допомогою реакції "антиген - антитіло". Такий спосіб дослідження вважається більш інформативним.

ІГХ показує не тільки наявність атипових клітин. За допомогою цього дослідження можна виявити:

• різновид новоутворення;
• поширення онкологічного процесу;
• розташування первинної метастазуючою пухлини;
• стадію раку;
• темпи зростання пухлини.

Крім цього, за допомогою імуногістохімії можна визначити чутливість ракових клітин до хіміопрепаратів і опромінення. Це дозволяє вибрати найбільш ефективний метод лікування.

показники

У розшифровці ІГХ-дослідження вказують концентрацію антигенів злоякісних новоутворень. У нормі такі білки повинні повністю бути відсутнім. Їх наявність в біоматеріалу вказує на розвиток пухлини. Чим вище концентрація антигенів, тим активніше відбувається розростання новоутворення.

Крім цього, в результатах аналізу вказують різновид атипових клітин і їх кількість. Точно інтерпретувати дані тесту може тільки лікар-онколог.

Виявлення раку грудей

Цей аналіз призначають при підозрі на рак молочної залози. ІГХ-дослідження в цьому випадку допомагає виявити не тільки наявність злоякісних клітин, а й чутливість рецепторів новоутворення до гормонів. Адже нерідко ріст пухлини молочних залоз залежить від рівня естрогену і прогестерону. За допомогою цього дослідження можна також оцінити необхідність призначення гормональних ліків.

Для діагностики раку молочної залози використовується спеціальний набір маркерів. У розшифровці аналізу необхідно звернути увагу на концентрацію антигену Ki-67. За цим показником можна судити про прогноз захворювання, адже він вказує на швидкість росту пухлини.

Концентрація антигену визначається у відсотках. Залежно від рівня Ki-67 підбирається метод лікування:

1. Менше 15%. Прогноз захворювання вважається сприятливим. Можливо лікування за допомогою гормональної терапії.
2. Від 16 до 30%. Помірне зростання новоутворення. Поширення пухлини можна призупинити за допомогою гормонів.
3. Більше 30%. Така концентрація антигену свідчить про швидке зростання ракової пухлини. Необхідно призначення хіміотерапії.

Якщо показник антигену становить менше 10%, то в переважній більшості випадків зростання пухлини вдається зупинити за допомогою гормонів. Вкрай небезпечною вважається концентрація Ki-67 більше 90%. Це вказує на запущену стадію раку. У таких випадках захворювання найчастіше призводить до летального результату.

Застосування в гінекології

Нерідко лікарі призначають пацієнткам ІГХ-дослідження при дисплазії шийки матки. Ця патологія супроводжується переродженням здорових клітин в атипові. Такий стан лікарі оцінюють як передраковий. Дисплазія 3 ступеня практично завжди призводить до утворення злоякісної пухлини на шийці матки.

ІГХ допомагає оцінити ризик розвитку онкологічних захворювань у пацієнток з дисплазією. Для дослідження використовують антитіла до білків p16INK4a і Ki-67.

При аналізі визначають не тільки концентрацію антигенів, але і співвідношення між рівнями вищевказаних білків. Референсні значення показників дослідження індивідуальні і залежать від передбачуваного діагнозу. Точно розшифрувати результати тесту може тільки лікуючий лікар. Високі показники концентрації антигенів і співвідношення між p16INK4a і Ki-67 вказують на великий ризик розвитку раку шийки матки.

Де можна здати

Де проводять ІГХ-дослідження? Такий тест можна зробити в багатьох комерційних медичних центрах і лабораторіях (наприклад, в "Інвітро" або "Гемотест"), а також у великих онкологічних медустановах. Проведення аналізу не вимагає перебування пацієнта в стаціонарі, за винятком тих випадків, коли дослідження проводиться після хірургічного втручання.

Імуногістохімія не входить до переліку послуг, які надаються за полісом ОМС. Тому цей аналіз можна зробити тільки платно. Його ціна варіюється від 4000 до 20 000 рублів. Вартість тесту залежить від кількості антигенів, які належить виявити в біоптаті. Чим більша кількість маркерів зазначено в напрямку на аналіз, тим вище ціна дослідження.

Альтернативні назви: ІГХ, англ .: Immunohistochemistry або IHC.

Імуногістохімічне дослідження - особливий метод діагностики пухлинних захворювань. Суть методу полягає у вивченні під мікроскопом образів тканин, попередньо оброблених специфічними антитілами.

В даний час створені антитіла практично до всіх пухлин.

За допомогою імуногістохімічного дослідження виконується:

Показання для імуногістохімічного дослідження

За допомогою цього методу можна досліджувати будь-які тканини. Головним показанням до проведення є підозра на пухлинний процес.

Визначено такі показання для ІГХ:

Протипоказання

До даного методу досліджень немає протипоказань. Його проведення неможливо лише в тому випадку, якщо немає можливості отримати біопсійний матеріал.

Як проводиться імуногістохімічне дослідження

Саме дослідження складається з чотирьох етапів:

Результати дослідження стають відомі через 7 днів (при стандартному дослідженні - «мала панель») або через 15 (розширене дослідження - «велика панель»).

інтерпретація результатів

Вивченням зразків займається лікар-патологоанатом, який пройшов спеціальну підготовку по ІГХ. У висновку лікар зазначає, до яких антитіл визначена тропность (спорідненість) тканини. Додатково описується морфологічна структура зразка - які клітини і в якій кількості присутні.

Виявлення спорідненості тканини до визначених стандартних пухлинних антитіл свідчить про конкретний вид онкологічного захворювання.

додаткова інформація

Імуногістохімічне дослідження в даний час є найбільш точним методом діагностики пухлинних захворювань. Воно дозволяє з точністю до 99% поставити остаточний діагноз, визначити вид пухлини, виявити її первинну локалізацію.

література:

Імуногістохімічне дослідження при раку молочної залози - це аналіз, який дозволяє визначити чутливість новоутворення злоякісного характеру до деяких речовин. З його допомогою діагностують стадію патології і дізнаються, чи правильно було призначене лікування.

Що таке ІГХ?

Якщо говорити про те, що таке ІГХ онкології, то це дослідження, що дозволяє виявити взаємодію між білками і антигенами. Справа в тому, що клітини, уражені онкологією, синтезують білок. Він має зв'язок з антитілами. З огляду на це, фахівці за допомогою аналізу визначають форму і структуру пухлини.

Навіщо проводять ІГХ?

ІГХ при проводять з метою:

• визначення виду захворювання для призначення терапії;
• розкриття наявність метастаз, що йдуть від пухлини, і їх межі;
• виявлення джерела метастаз;
• діагностування стадії патології при її виявленні;
• оцінки ефективності терапії;
• встановлення швидкості розвитку метастаз при наявності таких;
• виявлення чутливості клітин крові до тих чи інших препаратів і методів лікування, щоб залишити ефективні засоби і виключити ті медикаменти і способи терапії, які не впливають на пухлину.

Як робиться аналіз?

Імуногістохімія раку молочної залози проводиться шляхом забору тканини, ураженої онкологією. Біоматеріал видобувається за допомогою біопсії або в процесі оперативного втручання. Після цього виконується аналіз за такими етапами:

• біоматеріал поміщається в формалін, після чого переправляється в лабораторію для проведення подальших маніпуляцій;
• фахівці знежирюють тканину;
• в матеріал додається спеціальний рідкий парафін, який допомагає виявити структуру клітин пухлини;
• виконується мікротравмування - процедура зрізання тонкого шару парафіну, товщиною в 1 мм;
• взяті зразки розміщуються на спеціальних стеклах;
• виконується фарбування матеріалу за допомогою реактивів;
• зразки залишають на 12 днів, після чого оцінюють результат.

Для проведення аналізу використовують кілька видів маркерів. Якщо в ході дослідження в біоматеріалу виявлена \u200b\u200bпідвищена концентрація естрогену і прогестерону, роблять висновок про розвиток пухлини. Це також говорить про появу метастазів від новоутворення. Якщо аналіз показав середні результати, то говорять про слабке зростання пухлини. Це говорить про те, що хворий після відповідної терапії має всі шанси на одужання.

Чисто рецепторів HER2 впливають на колірну гамму реакторів з клітинами, які вражені раком. Чим їх більше, тим яскравіше тон. В цьому випадку гістологія проявляється себе, як неточна наука, оскільки сприйняття відтінків зразків суб'єктивне і залежить тільки від відчуттів фахівця, що виконує аналіз.

розшифровка результатів

При розшифровці результатів враховують рецептори до прогестерону - PR і естрогену - ER. ІГХ в онкології також показує вміст рецептора людини епідермального фактора росту (HER2-білка) в біоматеріалу, який взятий як зразок для проведення дослідження. У жінок з карциномою молочної залози спостерігається підвищений HER2.

Розшифровка результатів по естрогену і прогестерону - якщо в пухлини виявлені рецептори до чоловічих і жіночих гормонів, то зростання освіти відбувається під їх впливом, якщо PR і ER в організмі присутні в нормі або їх концентрація збільшена. При своєчасному кваліфікованому лікуванні пацієнт може розраховувати на успішному результаті.

Розшифровка результатів ІГХ виконується в залежності від відтінку зразків за спеціальною шкалою:

• 0-1 +. Такий результат говорить про те, що концентрація білка не перевищено. Терапія патології не потрібно.
• 2+. Значення вказується на середню концентрацію білка. Це говорить про наявність негативної пухлини (карциноми) грудей. В цьому випадку рекомендується виконати ще один аналіз, оскільки перше дослідження не завжди дає точний результат. Для уточнення діагностики виконують тест FISH. Таке дослідження визначає концентрацію білка в кожній клітині. При нормальному вмісті HER2 аналіз покаже позитивний результат, а при підвищеному - негативний.
• 3+. Білок перевищує норму. Діагностується позитивна пухлина грудей.

Якщо аналіз показав позитивну пухлина, значить, патологія має агресивний характер розвитку. Вона росте в кілька разів швидше, ніж при негативному значенні.

Після вивчення дослідження, розшифровується результат, виходячи з показника маркера Ki67. Якщо його значення знаходиться в межах норми, тобто 15-17%. При підвищенні його рівня до 35% пухлина починає швидко рости. Уповільнити процес допомагає хіміотерапія. Якщо аналіз показав 85%, лікарі відмовляються від лікування пацієнта, оскільки знизити маркер в такому випадку неможливо і смертельного результату не уникнути.

Виділяють 4 типи раку:

• люмінальной А - рецептори до ER позитивні, до білку негативні, Ki67 менше 14%;
• люмінальной Б - рецептори до ER, до HER2 - негативні, Ki67 більше 15%;
• Erb В2 сверхекспрессірующій - PR і ER - негативний, білок - позитивний;
• Базальноподобний - від'ємне значення до прогестерону і іншим факторам.

прогностичні фактори

Такі фактори демонструють можливу поведінку пухлини на момент аналізу. Лікування не впливає на дослідження. Лікар завдяки ІГХ бачить, як веде себе пухлину. Прогнозом фахівець користується для визначення відповідної терапії для кожного пацієнта.

пророкують чинники

Дослідження ІГХ раку молочної залози дозволяють визначити ефективність лікування. Якщо аналіз показав позитивний рак, то призначають хіміотерапію. При від'ємному значенні - прийом медикаментозних препаратів.

ІГХ - це дослідження, яке дозволяє визначити вид раку молочної залози і призначити адекватне лікування, що дозволяє врятувати пацієнтці життя, а в деяких випадках - позбутися від патології.